Cytogenetické poruchy v embryu během nevyvíjejícího se těhotenství

Webové stránky vydavatelství “Media Sfera”
obsahuje materiály určené výhradně pro zdravotnické pracovníky. Zavřením této zprávy potvrzujete, že jste registrovaný lékař nebo student zdravotnického vzdělávacího zařízení.

• (bezplatné číslo pro dotazy na předplatné)
  Po-Pá od 10 do 18 hodin

• Nakladatelství Media Sphere
  PO Box 54, Moskva, Rusko, 127238
• [email protected]

• vkontakte
• Telegram

• Nakladatelství
• “Mediální sféra”

Výsledky vyhledávání: 0

Federální státní rozpočtová instituce “Uralský výzkumný ústav pro ochranu matek a kojenců” Ministerstva zdravotnictví Ruska, Jekatěrinburg, Rusko

Výzkumný ústav pro ochranu mateřství a kojeneckého věku, Jekatěrinburg

Výzkumný ústav pro ochranu mateřství a kojeneckého věku, Jekatěrinburg

Cytogenetické poruchy v embryu během nevyvíjejícího se těhotenství

Více o autorech
Stáhnout PDF
Kontaktujte autora
obsah

Bashmakova N.V., Tretyakova T.B., Demchenko N.S. Cytogenetické poruchy v embryu během nevyvíjejícího se těhotenství. Ruský Bulletin porodníka-gynekologa. 2013;13(4):18‑21.
Bashmakova NV, Treťiakova TB, Demchenko NS. Cytogenetické poruchy u embryí během nevyvíjejícího se těhotenství. Ruský Bulletin porodníka-gynekologa. 2013;13(4):18‑21. (In Russ.)

Za účelem studia frekvence a struktury chromozomální patologie bylo vyšetřeno 71 vzorků embryonálních tkání od žen s nevyvíjejícím se těhotenstvím v prvním trimestru. Choriové klky získané z potratového materiálu byly podrobeny cytogenetické analýze ke stanovení karyotypu plodu. V důsledku toho byly objeveny všechny typy chromozomálních abnormalit: trizomie, monozomie, triploidie, mozaikové karyotypy. Nejčastější abnormalitou karyotypu potratů byla trizomie – 71 % případů. Nejběžnější trisomie byly chromozomy 21 a 160. Zajímavostí získaných výsledků je vysoká frekvence mozaikových forem chromozomálních poruch, která činila 34 % z počtu abnormálních karyotypů.

Federální státní rozpočtová instituce “Uralský výzkumný ústav pro ochranu matek a kojenců” Ministerstva zdravotnictví Ruska, Jekatěrinburg, Rusko

Výzkumný ústav pro ochranu mateřství a kojeneckého věku, Jekatěrinburg

Výzkumný ústav pro ochranu mateřství a kojeneckého věku, Jekatěrinburg

Doporučujeme články na toto téma:

Problém potratu je i nadále aktuální a společensky významný v praxi porodníka-gynekologa. Spontánní potraty tvoří 15–20 % všech chtěných těhotenství. Mezi různými formami potratů zaujímá zvláštní místo neúspěšný potrat (nevyvíjející se těhotenství) – smrt embrya v raných fázích těhotenství s velkým zpožděním v děložní dutině. Ve struktuře reprodukčních ztrát je počet případů nevyvinutých těhotenství 10-20%. Příčiny nevyvinutého těhotenství jsou četné a často složité [3]. V etiologii potratu hraje zvláštní roli chromozomální nerovnováha. V 6.–7. týdnu těhotenství má tedy 60–75 % potratů abnormální karyotyp, ve 12.–17. týdnu 15–20 % a v 17.–28. týdnu pouze 2–7 % [14].

Pokud tedy asi 50 % embryí v prvním trimestru těhotenství zemře v důsledku přirozeného výběru početí s abnormálním karyotypem, pak je příčina smrti ostatních embryí multifaktoriální povahy, tzn. je výsledkem aditivního působení mnoha faktorů spojených s embryem i matkou a také komplexu nepříznivých podmínek prostředí. Mezi faktory prostředí patří mezi příčiny samovolného potratu řada sociálních (kouření, stres, škodlivé pracovní faktory) a zdravotních faktorů (endokrinní, infekční, imunitní). Podle řady autorů však u 20–40 % případů samovolného potratu zůstává příčina nejasná. V současné době je zvláštní pozornost věnována studiu molekulárních variant řady genů, které modulují riziko rozšířených multifaktoriálních onemocnění, mezi které patří i syndrom spontánního potratu.

Bylo popsáno asi 7 různých skupin genů spojených s rizikem potratu. Patří sem následující genové sítě: detoxikační geny fáze II (GSTM1, GSTT1, GSTP1); geny plazmatické hemostázy (FGB, PTM, FVL, XII); geny imunitního systému (DQA1, DQB2, DQB1, HLA-G, ILIB); geny hormonálního metabolismu (PGR, ER); geny pro choriový a placentární růstový faktor (VEGF, IGF1, TNFA, TGFB); geny pro metabolismus kyseliny listové a vitaminu B₁₂ (MTHFR, MTRR, MTR) [1]. Vliv polymorfismu uvedených genů na systém matka-placenta-plod se provádí jak od matky, tak od plodu. Zvláštní roli v etiologii časné embryonální smrti mají poruchy samotného embrya: epigenetická regulace, nedetekované, vzácné mozaikové varianty chromozomálních abnormalit, uniparentální disomie, zvýšená frekvence mutací opakujících se sekvencí [4-7, 9, 12, 13].

Účelem této studie je studovat frekvenci a strukturu chromozomální patologie u potracených embryí u žen s nevyvíjejícím se těhotenstvím a anembryonií.

materiály a metody

Abortivní materiál pro studii byl získán z gynekologického oddělení Spolkového státního rozpočtového ústavu Výzkumného ústavu pro péči o matku a kojence v Jekatěrinburgu v letech 2010 až 2011. Pomocí standardní cytogenetické analýzy byl vyšetřen materiál ze 71 abortů v nerozvíjejících se těhotenstvích. Mezi nimi bylo získáno 63 vzorků od žen s klinickou diagnózou nevyvíjejícího se těhotenství, které byly provedeny při dynamickém ultrazvukovém vyšetření a vyznačovaly se přítomností intrauterinně mrtvého embrya v dutině plodového vaku. Zbývajících 8 vzorků potratového materiálu byly případy anembryonie, charakterizované absencí embryonálních struktur v dutině fetálního vaku. Fetální tkáně byly získány z děložní dutiny pomocí vakuové aspirace. Gestační věk embryí byl 4-11,5 týdne (7,5±1,8 týdne).

V 56 případech došlo k otěhotnění přirozeně, v 15 případech – v důsledku použití technologií asistované reprodukce. Ženy obdržely úplné informace o účelu studie a podepsaly informační souhlas s jejím provedením.

Fragmenty fetálního vaku byly důkladně promyty z krve a deciduální tkáně v médiu RPMI-1634 při teplotě místnosti. Vybrané jednotlivé choriové klky byly zpracovány podle standardního protokolu pro zrychlenou „přímou“ metodu přípravy chromozomových preparátů z choriových klků. Připravené preparáty byly obarveny standardní metodou diferenciálního G-barvení za použití 0,25% roztoku trypsinu a roztoku barviva Giemsa [1]. Karyotypizace byla provedena na mikroskopu Leica DM4000B se softwarem LeicaCW 4000 Karyo.

Výsledky a diskuse

Standardní cytogenetická analýza byla úspěšně provedena u 71 případů spontánního potratu. V důsledku cytogenetické studie byl ve 33 (46 %) případech identifikován normální karyotyp a ve 38 (54 %) případech abnormální karyotyp potratu. (Tabulka 1). Stanovený podíl abnormálních karyotypů je v souladu s předchozími studiemi jiných autorů. Podle zobecněných údajů je počet případů chromozomálních abnormalit u potratů s nevyvíjejícím se těhotenstvím před 10. týdnem gestace asi 60 % [1, 5, 11].

Mezi identifikovanými 38 případy abnormálního karyotypu u embryí byly nalezeny všechny typy chromozomálních abnormalit dříve popsané jinými autory v časné embryonální smrti, s výjimkou tetraploidie a markerových chromozomů [1, 4].

Nejčastější abnormalitou karyotypu potratů byla trizomie – 27 (71 %) případů (viz tabulka 1), jehož struktura je uvedena v tabulka 2. Nejčastěji se jednalo o trizomii 21 (29,6 %) a 16 (26 %) chromozomů. Dalšími nejčastějšími byly trizomie 18 (14,8 %) a 13 (7,4 %) chromozomů. Byly identifikovány izolované případy trizomie 1, 7, 15, 19 a 22. chromozomů. Mezi všemi detekovanými trizomiemi je 10 (37 %) případů zastoupeno mozaikovými variantami s euploidním buněčným klonem (viz tabulka 2).

Ve 2 případech byla nalezena komplexní varianta dvojité trizomie s účastí dalšího pohlavního chromozomu (X) a 21. v prvním případě, 7. a 20. chromozomu v druhém případě. (viz tabulka 1). Četnost jednotlivých trizomií je v souladu s pozorováními jiných autorů [2].

Podle literatury jsou případy autozomální monozomie extrémně vzácné [1] V naší studii jsme našli 1 případ monozomie 8. chromozomu v mozaikové formě (mos 45,ХX,-8[8]/46,ХХ[. 8]).

Chromozomální nerovnováha pohlavních chromozomů byla zjištěna ve 3 případech (viz tabulka 1). V jednom případě byla u mužského karyotypu přítomna dizomie chromozomu X (mos 48,ХХY,+21[7]/46,ХY[10]), ve druhém případě trizomie X u ženského karyotypu (mos 47,ХХХ [10]/45, Х[4]/46,ХХ[4]). Obě možnosti jsou identifikovány ve formě mozaiky. V 1 případě byla také detekována kompletní monosomie chromozomu X.

Jak vyplývá z tabulka 1, polyploidii ve studii zastupovala pouze triploidie u 6 (15,8 %) potratů, jejíž prevalence je v souladu s údaji o ostatních populacích [6, 11]. Triploidie je buď důsledkem poruchy dozrávání zárodečných buněk (chybějící redukce diploidní sady) nebo oplození jednoho vajíčka dvěma spermiemi [1, 15]. Jeden případ měl chimérickou karyotypovou variantu (chi 69,XXY[10]/46,XY[8]).

Zvláště zajímavé je studium struktury chromozomálních abnormalit u potratů s nejzávažnější morfologickou formou poruch embryogeneze – anembryonie. Podle výsledků vlastního výzkumu jsme mezi 8 případy anembryonie identifikovali 3 případy aneuploidního karyotypu s trizomií na chromozomech 15, 16 a 19 (Tabulka 3). Řada studií využívajících komparativní genomickou hybridizaci (CGH) ukázala, že abortus s anembryonií měl jak monosomie (chromozomy 7, 15, 21 a 22), tak trizomie (chromozomy 1, 2, 15 a 19) [1, 8].

Zajímavostí získaných výsledků je vysoká frekvence mozaikových forem chromozomálních poruch, která činila 34 % (13 případů) z počtu abnormálních karyotypů (viz tabulka 1). Podle studií jiných populací [6], provedených pomocí standardní cytogenetické analýzy, se počet případů mozaiky u všech chromozomů pohybuje od 0 do 14 %. Je třeba vzít v úvahu, že standardní cytogenetická analýza neumožňuje odlišit skutečnou trisomii a monosomii od ztráty chromozomů při přípravě preparátů, zejména s nízkou mozaikou. Navíc je počet metafázových destiček často omezen, což neumožňuje objektivní posouzení podílu abnormálního buněčného klonu. Spolehlivější výsledky o přítomnosti mozaikové varianty karyotypu lze získat pomocí metod molekulární cytogenetiky, například metodou FISH (fluorescence in situ hybridization), která umožňuje znásobit počet analyzovaných metafází. Vědci z Tomska metodou FISH objevili vysokou frekvenci mozaikových forem karyotypu samovolných potratů (37 %) [10]. V díle S.G. Vorsanova [2] metodou FISH detekovala mozaiku u 50,3 % potratů s abnormálním karyotypem. Proto se přikláníme k tomu, považovat zjištěnou mozaiku v extraembryonálních tkáních potratů za pravdivou, charakteristickou pro etiologii nevyvíjejícího se těhotenství. Abychom vyloučili falešně pozitivní mozaiku způsobenou chybami v technice přípravy cytogenetických preparátů, neustále se zdokonalujeme a kontrolujeme kvalitu zpracování biologického materiálu.

Mozaikové abnormality karyotypu jsou výsledkem somatické mutageneze v tkáních samotného embrya v postzygotických fázích vývoje. Jinými slovy, chromozomální abnormality u plodu se mohou objevit nejen ve fázi gametogeneze u rodičů zemřelého plodu, ale také během procesu implantace, morfogeneze a vývoje embrya s původně normálním karyotypem. V současnosti jsou za jednu z příčin chromozomální mozaiky v raných fázích lidské ontogeneze považovány poruchy epigenetické regulace exprese genů, které plní různé funkce během buněčného cyklu. Studie některých autorů naznačují vztah mezi cytogenetickými poruchami a abnormalitami v epigenetickém přeprogramování [10].

Je třeba poznamenat, že frekvence chromozomálních abnormalit mezi potraty s nevyvíjejícím se těhotenstvím je podle některých autorů vyšší než u spontánních potratů [6, 10]. Dá se tedy předpokládat, že smrt embrya při neúspěšném potratu je pravděpodobně častěji způsobena genetickými faktory. To vyvolává nové otázky o etiologii a mechanismech intrauterinní retence mrtvého embrya při neúspěšném potratu a příčinách smrti plodu s normální chromozomální konstitucí, o roli genetických a epigenetických faktorů v individuálním vývoji člověka.

Závěry

1. Nejčastější poruchou karyotypu u potracených žen s nevyvíjejícím se těhotenstvím byla trizomie (71 %).

2. Významnou část abnormálních karyotypů potratů představovaly mozaikové varianty (34 %).

3. Většina mozaikových karyotypů má nízkou frekvenci aneuploidních buněk, což ukazuje na mitotické chyby v postzygotickém stádiu vývoje embrya.